速看!少走实验弯路~若实验效果不好,请及时对显色结果拍照,保存实验数据,保留所用板条及未使用试剂,然后联系我公司技术支持为您解决问题。同时您也可以参考以下资料: | |||||||||
1. ELISA加完所有试剂后,读数所有孔都很弱或者没有读数,阳性对照很弱,什么原因? | |||||||||
序号 | 可能原因 | 解决方法 | |||||||
1 | 不同种属的试剂盒、不同批号的试剂混用 | 确定种属、使用同一批次试剂盒里面的试剂 | |||||||
2 | 标准品有问题、标准品的处理方法有问题 | 反思实验步骤、注意单位和稀释倍数、稀释方法 | |||||||
3 | 漏加酶结合物 | 回顾是否加入。未加入重新试验 | |||||||
4 | 显色液配置变质 | 更换新的显色液 | |||||||
5 | 终止液当作其他溶液使用 | 每次加入之前检查标签是否一致 | |||||||
6 | 洗涤液配置有误 | 按照说明书进行配置 |
2. ELISA实验标准曲线很好,样本OD值太高或太低,什么原因? | ||||||||
序号 | 可能原因 | 解决方法 | ||||||
1 | 标准曲线选择不合适 | 选择最佳的标准曲线拟合 | ||||||
2 | 样本含量太低,没有被检测到 | 尝试浓缩样本或者使用高敏ELISA试剂盒 | ||||||
3 | 样本含量太高,超过标曲 | 增加预实验探索稀释倍数,确保样本OD数值在标曲内 | ||||||
3. 标准品最高点吸光值一般在3.0左右,但是已经是5左右了,什么原因? | ||||||||
序号 | 可能原因 | 解决方法 | ||||||
1 | 如果OD值绝对靠谱,那就是显色过度 | 按照显色的情况,之前介绍的标准进行终止 | ||||||
2 | 只做了单波长检测 | 可尝试使用双波长检测 |
4. 显色很弱或无色,什么原因? | |||||||
序号 | 可能原因 | 解决方法 | |||||
1 | 孵育时间太短 | 保证充足的孵育时间 | |||||
2 | 实验温度不正确 | 使用推荐的实验温度(37℃) | |||||
3 | 试剂体积不够或漏加 | 检查吸液及加液过程,保证所有试 剂按顺序足量添加 | |||||
4 | 稀释不正确 | ||||||
5 | 酶标记物失活或底物失效 | 混合酶结合物和底物,通过迅速显 色来检查判断 | |||||
5. 读数数值低,是什么原因? | |||||||
序号 | 可能原因 | 解决方法 | |||||
1 | 酶标仪设置不正确 | 在酶标仪上检查波长及滤光片设置;提前打开酶标仪预热 |
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