ELISA常见样本：

液体样本、固体样本、植物样本

       收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的标本储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-80℃条件下保存。但注意避免反复冻融。可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。适当的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法：

一. 液体样本：

【血清】：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注意事项：在收集血液样本的过程中应避免溶血。

【血浆】： 用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【细胞培养上清】:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 

【尿液、唾液、脑脊液】：用无菌管收集，2-8℃条件离心5分钟左右（5000-6000转/分钟）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

二. 固体样本：（称取1g的固体样本，用9ml的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。）

【组织标本】：加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 通常按组织重量:PBS体积=1:9的比例匀浆,例如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数 。

【土壤样本】：

1， 称取土壤500mg左右，必须保持鲜重，按照重量和体积比加入1:9的PBS溶液（PBS的浓度为0.01mol/L,PH控制在7.2-7.4），例如称取的是0.5g加入5ml的PBS，称取的重量不要求保持一致，但匀浆的比例都是按照1:9的关系来。

2， 进行涡旋震荡，充分混匀，涡旋时间30秒

3， 离心取上清，离心转速为4000转每分，时间为15分钟左右，取上清液待检测。

【培养细胞】： 检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

细胞裂解方法：

）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集） ；

2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3次；

3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融） ：

       ⇒ 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂；

       ⇒ 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 度以下冰冻，室温融解，反复3次，使细胞溶胀破碎；

4）将标本于2-8 度 1500×g 离心 10 分钟，收集上清备用。

三. 植物样本：

1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨，如无液氮，剪碎，玻璃匀浆器研磨也可；

2、 加入样品体积9倍（鲜重：匀浆液体积）的提取液（0.1mmol PH7.4 PBS ）, 4℃浸提2h；

3、 请于4℃ ，3000rpm，离心10min，收集上清；

4、 取上清检测。 

【细菌裂解液】：

1、 收集细菌悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。

2、加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细菌。通常6孔板一个孔的细菌量需要150~250μL PBS重悬。

3、 将样品放入-20℃或-80℃，用高压细菌破碎机或者使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细菌充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。

4、 4℃ 10000×g 离心10min，除去细菌碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。