小鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA检测试剂盒使用手册 

                                                                       产品货号：XZK-10052

【摘要】：肿瘤坏死因子β（TNF-β），是一种类细胞因子，是由LTA基因编码的蛋白质。它属于造血细胞系，它表现出抗增殖活性并导致肿瘤细胞系的细胞破坏。作为一种细胞毒性蛋白，它在免疫调节中具有多种重要作用，这取决于其分泌的形式。与TNF超家族的其他成员不同，它仅被发现为可溶性同种三聚体，当在细胞表面发现时，它仅被发现为与LTβ的异质三聚体。它免疫系统的维持有重大影响，包括继发性淋巴器官的发育。缺乏LT-α会导致胃肠道发育中断，阻止Peyer的贴片发育，并导致脾脏紊乱。它参与细胞存活、增殖、分化和凋亡的调节。它的效应取决于它所作用的器官类型，癌细胞的类型，细胞环境，性别以及免疫反应期间的作用时间。它由Th1细胞产生，可诱导血管内皮细胞表面粘附分子的改变，并促进吞噬细胞与之结合。

【产品用途】：本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中TNF-β含量。凡订购我司任意一款试剂盒均享受免费代测服务，欢迎咨询、订购！

检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肿瘤坏死因子β（TNF-β）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子β（TNF-β）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

小鼠肿瘤坏死因子β（TNF-β）ELISA检测试剂盒组成：（检测范围请以新版说明书为准）

注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。 

样本处理及要求：

【血清】：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【血浆】：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【组织匀浆】：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

【细胞培养物上清】：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

【其它生物标本】：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

【样品外观】：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

【样品保存】：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

试剂的准备：

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。