兔尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）ELISA检测试剂盒使用手册 

                                                                       产品货号：XZK-12780

【摘要】：尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)是一种丝氨酸蛋白水解酶。小鼠uPA基因位于第10条染色体长臂上，其长度为6.5KD，由11个外显子构成，可转录成24KB的成熟的mRNA，初始翻译产物为前尿激酶原（含431个氨基酸残基），除去20个氨基酸残基的信号肽后即为细胞分泌的尿激酶原（pro-uPA），在158LYs位处劈裂，则成为由二硫键连结的双链活性型结构，即20×103的A链和34×103的B链。C端的A链包括一个Kringle区和表皮生长因子（EGF）功能区，表皮生长因子功能区能介导与特异的受体结合，去掉此功能区，其仍具有激活纤溶酶原作用，但却无与受体结合的能力。C端的B链有丝氨酸蛋白酶功能区，为uPA的活性中心。uPA的合成与分泌受诸多因素影响，如原癌基因V-Src、Ras、细胞因子TNF、INF、IL-1、TGF-β、IGF-1、FGF、基质金属蛋白酶等。一般说来，uPA主要在生理、病理条件下与细胞分化、迁移、组织重建、细胞周围基质降解有关。

【产品用途】：本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中的uPA。凡订购我司任意一款试剂盒均享受免费代测服务，欢迎咨询、订购！

实验前准备要点：

1. 准备各种实验仪器及材料（如：37℃恒温箱，450nm酶标仪、高速离心机、高精度加样器及枪头等等）

2. 按照生物实验室安全防护条例，穿着实验服并佩戴乳胶手套做好防护工作

3. 使用前应将试剂盒内各试剂取出，平衡至室温（至少30分钟）

4. 严格按照说明书的操作方法进行操作。说明书以英文说明书为准。

兔尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）ELISA检测试剂盒组成：（检测范围请以新版说明书为准）

注意：使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致。 

操作步骤：

【平衡试剂盒至常温】：取出实验过程中所需板条，剩余半条用自封袋密封放回4摄氏度。

【加样】：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。在样本孔先加样本10μl再加稀释液40μl，（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
【加酶】：标准品孔和样本孔总每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL空白孔除外。
【温育】：用封板膜封住反应孔，37℃恒温箱温育60分钟。
【配液】：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
【洗涤】：小心揭掉封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置60秒后甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复5次（也可用洗板机洗板）。

【显色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育15分钟。
【终止】：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
【测定】：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

【说明】：电子版说明书仅供参考，实际操作请按照随产品发送的印刷版说明书。中英文说明书可能会有不一致的地方请以英文说明书为准。

安全性：

1． 避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：2-8℃

2.有效期：6个月